Изучение источников заражения цыплят-бройлеров сальмонеллами с использованием ERIC-ПЦР и реакции агглютинации с флюоресцентно-мечеными антигенами (ИРА)

Цель исследования — разработать диагностические алгоритмы использования ERIC-ПЦР и ИРА, которые позволят выявлять пути заноса сальмонелл на птицефабрику. Изучали генетические различия 15 изолятов Salmonella spp., выделенных из патологического материала, кормового сырья и смывов из птичников птицефабрик бройлерного направления (родительское стадо и ремонтный молодняк) Западно- Сибирского региона. Видовую принадлежность культур сальмонелл подтверждали методом секвенирования и/или с использованием биохимических тестов и агглютинационных сывороток. ДНК бактерий выделяли стандартным силико - сорбционным методом. Анализ геномной ДНК изучаемой коллекции сальмонелл методом ERIC-ПЦР позволил сгруппировать полученные штаммы и изоляты в три генотипа, отличающиеся друг от друга паттернами ампликонов на электрофорезе в полиакриламидном геле. Сопоставление результатов ИРА с сыворотками крови птицы родительского стада и ремонтного молодняка птицефабрики №1 позволило выявить антитела как к сальмонеллам генотипа 1, так и к сальмонеллам генотипа 2 в большинстве обследованных стад птицы. Анализ корреляции титров антител к антигенам сальмонелл 1-го и 2-го генотипов позволил исключить перекрестную реакцию, так как в отдельных птичниках корреляционная зависимость была отрицательной, в двух птичниках положительной и в одном птичнике отсутствовала. Система реакции иммунофлуоресцентной агглютинации позволяет достаточно специфично различать серопревалентность к разным штаммам сальмонелл на отдельно взятых сельскохозяйственных предприятиях. Совокупность данных серологического анализа позволяет говорить о том, что у части птицы наблюдается повышенная восприимчивость к заражению сальмонеллами обоих генотипов, что позволяет предполагать у данных особей наличие генетических особенностей или особенностей кишечной микробиоты, связанных с восприимчивостью к заражению сальмонеллами.

1. Recent Multistate Outbreaks of Human Salmonella Infections Acquired from Turtles: A Continuing Public Health Challenge / R. Julie [et al.] // Clinical Infectious Diseases. – 2010. – Vol. 50. – P. 554–559.

2. Comparison of genotyping methods by application to Salmonella Livingstone strains associated with an outbreak of human salmonellosis. / J. Eriksson, C. Lofstrom, A. Aspan [et al.] // Int J Food Microbiol. – 2005. – Vol. 25. – P. 93–103.

3. Wilson L.A., Sharp P.M. Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus (ERIC) Sequences in Escherichia coli: Evolution and Implications for ERIC-PCR // Mol. Biol. Evol. – 2006. – Vol. 23. – P. 1156–1168.

4. McClelland M., Welsh. J. DNA fingerprinting by arbitrarily primed PCR // Genome Res. – 1994. – Vol. 4. – Р. 59–65.

5. Population structure, origins and evolution of major Salmonella enterica clones / R. Lan [et al.] // Infect Genet Evol. – 2009. – Vol. 9, N 5. – P. 996–1005.

6. Rapid outbreak assessment. Unusual increase of Salmonella Mikawasima infections in humans // European Centre for Disease Prevention and Control, Stockholm, 28 November. – 2013. – P. 1–9.

7. Rapid risk assessment. Multi-country outbreak of Salmonella Stanley infections // European Centre for Disease Prevention and Control, Stockholm, 27 July. – 2012. – P. 1–6.

8. Comparison of Subtyping Methods for Differentiating Salmonella enterica Serovar Typhimurium Isolates Obtained from Food Animal Sources / S. L. Foley [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 2006. – Vol. 44, N 10. – Р. 3569–3577.

9. Strain differentiation of Indian isolates of Salmonella by ERIC-PCR / M. K. Saxena [et al.] // Res Vet Sci. – 2002. – Vol. 73. – P. 313–314.

10. The Global Burden of Nontyphoidal Salmonella Gastro- enteritis / S. E. Majowicz [еt аl.] // Clinical Infectious Diseases. – 2010. – Vol. 50, N 6. – P. 882–889.

11. Изучение эпизоотической значимости Salmonella enterica серотипа Hamburg на птицеводческих предприятиях с использованием серологических исследований / Ю.С. Хоменко, О.С. Козлова, А.В. Афонюшкин, В.Н. Афонюшкин // Птицеводство. – 2022. – № 12. – С. 92–95.

12. Cпособ определения антител к бактериальным антигенам: Патент № 2563885 C1 / В.Н. Афонюшкин, М.Л. Филипенко, А.С. Киревичева [и др.]. – Заявл. 03.06.2014, Опубл. 27.09.2015.

13. Versalovic J., Koeuth T., Lupski J.R. Distribution of repetitive DNA sequences in eubacteria and application to fingerprinting of bacterial genomes // Nucleic Acids Res. 1991. – Vol. 19 – P. 6831– 6832.

14. Шагинян И.А. Роль и место молекулярно-генетических методов в эпидемиологическом анализе внутрибольничных инфекций // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2000. – Т. 2. – С. 82–95.

15. Variation in Salmonella enteritidis RAPD-PCR patterns may not be due to genetic differences / D. L. Mathis [et al.] // Avian Dis. – 2011. – Vol. 55. – P. 620–625.