ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОСТИ БЕЛКОВ БРУЦЕЛЛ В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ

Прижизненная диагностика бруцеллеза животных основана главным образом на использовании серологических реакций, таких как РА, РБП и/или РСК. В этих тестах антитела определяются с помощью антигена, изготавливаемого из S-клеток бруцелл, главным компонентом которых являются липополисахариды (ЛПС). Последние могут быть причиной перекрестных реакций с другими клинически значимыми грамотрицательными бактериями, что приводит к получению ложноположительных результатов. В этой связи белки внешней мембраны (БВМ) бруцелл находятся в центре внимания исследователей, занимающихся совершенствованием диагностики бруцеллеза. В работе приведены результаты изучения антигенности пяти рекомбинантных белков бруцелл (рБВМ19, рБВМ25, рБВМ31, рВР26 и рСОД) и экстрагируемого белкового антигена (ЭБА) B. abortus и/или B. melitensis в непрямом иммуноферментном анализе (н-ИФА) на сыворотках крови крупного рогатого скота и овец, реагирующих на бруцеллез в классических серологических реакциях. Среди использованных белковых препаратов наиболее антигенным оказался ЭБА, который обнаруживал антитела у 94,8% крупного рогатого скота и 69% овец. Антитела, специфичные к рБВМ19, рБВМ25 и рБВМ31, детектировались лишь у 39; 50,6 и 76,6% серопозитивных коров соответственно. Периплазматические белки – рВР26 и рСОД оказались менее антигенными, чем внешнемембранные, выявляя наличие анти-Brucella антител только у 29,9 и 14,3% крупного рогатого скота соответственно. Рекомбинантные белки не распознавались антителами серопозитивных овец. Антитела к рекомбинантным белкам в н-ИФА обнаруживались у незначительного количества крупного рогатого скота благополучной фермы (от 2,1 до 12,5%). Полученные результаты свидетельствуют о необходимости проведения экспериментального заражения животных с целью объективной оценки потенциала рекомбинантных белков в диагностике бруцеллеза.

1. Pappas G. Brucellosis in the world today [Электрон. ресурс] // HCDCP E-bulletin. – Режим доступа: http://www2.keelpno.gr/blog/?p=2033.

2. Диагностическая ценность РИД с разными О-ПС антигенами при бруцеллезе крупного рогатого скота / П.К. Аракелян, Г.В. Разницына, Т.А. Янченко [и др.] // Ветеринария. –2016. –№ 7. – С. 25–30.

3. Humoral immune response against lipopolysaccharide and cytoplasmic proteins of Brucella abortus in cattle vaccinated with B. abortus S19 or experimentally infected with Yersinia enterocolitica serotype O:9 / P.C. Baldi, G.H. Giambartolomei, F.A. Goldbaum [et al.] // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. – 1996. – Vol. 3. – Р. 472–476.

4. Мониторинг и анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота в Республике Казахстан за 2007–2015 годы / А.Е. Ешмухаметов, К.К. Бейсембаев, Ж.С. Асауова [и др.] // Вестн. Костанай. гос. ун-та им. А. Байтурсунова. – 2016. – № 2. – С. 36–41.

5. Immunogenic proteins of Brucella abortus to minimize cross reactions in brucellosis diagnosis / K.Y. Ko, J.W. Kim, M. Her [et al.] // Veterinary Microbiology. – 2012. – Vol.156. – Р. 374–380.

6. Cloning, Expression and Characterisation of Recombinant Outer Membrane Protein 16 from Brucella spp. / G. Kaur, R. Verna, B.V.S. Kumar [et al.] // Proc. Natl. Acad. – 2015. – Vol. 85. – Р. 853–858.

7. Mohammadi E., Golchin M. Detection of Brucella abortus by immunofluorescence assay using anti outer membrane protein of 19 kDa antibody //Adv Clin Exp Med. – 2018. – Vol. 27. – P. 643–648.

8. Nucleotide sequence and expression of the gene encoding the major 25-kilodalton outer membrane protein of Brucella ovis: Evidence for antigenic shift, compared with other Brucella species, due to a deletion in the gene / A. Cloeckaert, J.M. Verger, M. Grayon [et al.] // Infect. Immun. – 1996. – Vol. 64. – P. 2047–2055.

9. Effective use of recombinant Brucella ovis Omp31 antigen to detect cattle serum antibodies by the ELISA indirect test / M.C. Navarro-Soto, R. Gomez-Flores, A. Morales- Loredo [et al.] // Proceedings of Biotechnology Summit. – Mexico, 2014. – P.139–143.

10. Expression, purification and immunochemical characterization of recombinant OMP28 protein of Brucella species / Y. Manat, A.V. Shustov, E. Evtehova, S.Z. Eskendirova // Open Veterinary Journal. – 2016. – Vol. 6. – P. 71–77.

11. Structural, Functional, and Immunogenic Insights on Cu, Zn Superoxide Dismutase Pathogenic Virulence Factors from Neisseria meningitidis and Brucella abortus / A.J. Pratt, M. DiDonato, D.S. Shin [et al.] //J. Bacteriol. – 2015. – Vol. 197, № 24. – Р. 3834–3847.

12. Tabatabai L.B., Deyoe D.L. Biochemical and biological properties of soluble protein preparations from Brucella abortus // Developments in biological standardization. – 1984. – Vol. 56. – P. 199–211.

13. Получение штамма продуцента рекомбинантного БВМ19 Brucella abortus и изучение его антигенности / А.К. Булашев, К.Т. Турсунов, Ж.К. Каирова [и др.] // Вестн. КазАТУ им. С. Сейфуллина. – 2018. –№ 3. – C. 117–127.

14. Пат. № 30873 РК, МПК C12N 15/52, C12N1/21 Рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21 (DE3) /pET22/SOD, продуцирующий Cu/Zn-зависимую супероксиддисмутазу / С.З. Ескендирова, А.В. Шустов, Е.Б. Евтыхова, Е. Манат; заявитель и патентообладатель Национальный центр по биотехнологии РК. –№ 2014/1335.1; заявл. 17.10.2014; опубл. 25.12. 2015, Бюл. № 12. – 5 с.

15. Serological diagnostic potential of recombinant outer membrane proteins (rOMPs) from Brucella melitensis in mouse model using indirect enzyme-linked immunosorbent assay / I. Ahmed, S. Khairani-Bejo, L. Hassan [et al.] // BMC Vet. Res. – 2015. – Vol. 11:275. – DOI: 10.1186/s12917–015–0587–2.